藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)中新增雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)確證實(shí)例

文章來(lái)源：http://www.tjpandora.cn 發(fā)布時(shí)間：2025-06-30 瀏覽次數(shù)：60

藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)是藥物開(kāi)發(fā)過(guò)程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，旨在評(píng)估藥物在特定條件下的化學(xué)穩(wěn)定性和有效期。在穩(wěn)定性試驗(yàn)過(guò)程中，常常會(huì)發(fā)現(xiàn)新增雜質(zhì)的產(chǎn)生，這些雜質(zhì)可能對(duì)藥物的安全性和有效性產(chǎn)生重要影響。因此，對(duì)新增雜質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確的結(jié)構(gòu)確證具有重要意義。

新增雜質(zhì)的定義與來(lái)源

新增雜質(zhì)是指在穩(wěn)定性試驗(yàn)條件下，由原料藥或制劑中的活性成分發(fā)生化學(xué)變化而產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。這些雜質(zhì)在初始狀態(tài)下含量極低或不存在，隨著時(shí)間推移和環(huán)境條件變化而逐漸積累。常見(jiàn)的降解途徑包括氧化、水解、光解、熱分解和聚合反應(yīng)等。

結(jié)構(gòu)確證方法

1. 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS/MS）

LC-MS/MS是雜質(zhì)結(jié)構(gòu)確證的核心技術(shù)。通過(guò)精確質(zhì)量數(shù)測(cè)定，可以確定雜質(zhì)的分子式，為后續(xù)結(jié)構(gòu)解析提供重要信息。

2. 核磁共振波譜技術(shù)（NMR）

一維和二維NMR技術(shù)能夠提供詳細(xì)的結(jié)構(gòu)信息，包括原子連接方式和空間構(gòu)型。特別是在獲得足夠純度的雜質(zhì)樣品后，NMR分析是最終確證結(jié)構(gòu)的"金標(biāo)準(zhǔn)"。

3. 紅外光譜（IR）和紫外光譜（UV）

這些技術(shù)可以提供官能團(tuán)信息和共軛系統(tǒng)特征，為結(jié)構(gòu)確證提供輔助證據(jù)。

實(shí)例分析：阿莫西林降解雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)確證

背景

阿莫西林是一種廣泛使用的青霉素類抗生素。在40℃/75%RH的加速穩(wěn)定性試驗(yàn)條件下，HPLC檢測(cè)發(fā)現(xiàn)一個(gè)新增雜質(zhì)峰，保留時(shí)間約為11.5分鐘，在6個(gè)月時(shí)含量達(dá)到0.15%。

分離純化

首先采用制備型HPLC對(duì)雜質(zhì)進(jìn)行分離純化。使用C18色譜柱，以水-乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫，成功分離得到純度>95%的雜質(zhì)樣品約2mg。

質(zhì)譜分析

LC-MS分析顯示該雜質(zhì)的分子離子峰[M+H]+為348.1，比阿莫西林分子量（365.4）減少17個(gè)質(zhì)量單位，提示可能發(fā)生了脫氨反應(yīng)。MS/MS裂解模式顯示特征碎片離子106.1和114.1，與阿莫西林的裂解規(guī)律相似。

NMR結(jié)構(gòu)確證

通過(guò)1H NMR分析發(fā)現(xiàn)：

· 芳環(huán)質(zhì)子信號(hào)基本保持不變

· α-H質(zhì)子從單重峰變?yōu)殡p重峰

· 氨基質(zhì)子信號(hào)消失

· 新出現(xiàn)羰基碳信號(hào)（13C NMR在172 ppm）

結(jié)合2D NMR（COSY、HSQC）數(shù)據(jù)，確證該雜質(zhì)為阿莫西林α-氨基脫氨后形成的酮類化合物。

降解機(jī)理推測(cè)

基于結(jié)構(gòu)確證結(jié)果，推測(cè)降解機(jī)理為：在高溫高濕條件下，阿莫西林α-位氨基發(fā)生氧化脫氨反應(yīng)，形成相應(yīng)的酮類降解產(chǎn)物。該反應(yīng)可能通過(guò)亞胺中間體進(jìn)行。

毒理學(xué)評(píng)估

根據(jù)ICH M7指導(dǎo)原則，采用DEREK和SARAH系統(tǒng)對(duì)確證的雜質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行毒理學(xué)評(píng)估，結(jié)果顯示該雜質(zhì)無(wú)明顯致突變性警示結(jié)構(gòu)，但仍建議控制其含量不超過(guò)0.5%。

結(jié)論與意義

通過(guò)系統(tǒng)的分離純化、質(zhì)譜分析和NMR結(jié)構(gòu)確證，成功確定了阿莫西林穩(wěn)定性試驗(yàn)中新增雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。這一工作不僅為制劑穩(wěn)定性評(píng)價(jià)提供了科學(xué)依據(jù)，也為雜質(zhì)控制策略的制定和生產(chǎn)工藝的優(yōu)化提供了重要參考。

雜質(zhì)結(jié)構(gòu)確證工作需要多種分析技術(shù)的綜合應(yīng)用，要求分析人員具備扎實(shí)的化學(xué)基礎(chǔ)和豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。隨著分析技術(shù)的不斷發(fā)展，特別是高分辨質(zhì)譜和二維NMR技術(shù)的普及，雜質(zhì)結(jié)構(gòu)確證的效率和準(zhǔn)確性將進(jìn)一步提高，為藥物質(zhì)量控制提供更強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。