痕量亞硝胺類雜質(zhì)高靈敏度檢測(cè)方法的開發(fā)與驗(yàn)證

文章來源：http://www.tjpandora.cn 發(fā)布時(shí)間：2025-02-28 瀏覽次數(shù)：56

亞硝胺類化合物(N-亞硝基胺，簡稱NA)是一類具有致癌性、致突變性和致畸性的化學(xué)物質(zhì)，普遍存在于食品、藥品、化妝品等多種產(chǎn)品中。近年來，全球多個(gè)國家和地區(qū)的藥品監(jiān)管部門相繼發(fā)布了關(guān)于亞硝胺類雜質(zhì)控制的指導(dǎo)文件，對(duì)痕量NA的檢測(cè)提出了更高要求。本文介紹痕量亞硝胺類雜質(zhì)高靈敏度檢測(cè)方法的開發(fā)與驗(yàn)證過程。

檢測(cè)方法的開發(fā)背景

亞硝胺類雜質(zhì)的檢測(cè)難點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：首先，其在藥品和原料藥中含量極低，通常在ppb甚至ppt級(jí)別；其次，不同亞硝胺類化合物的物理化學(xué)性質(zhì)存在顯著差異，難以采用單一方法進(jìn)行全面檢測(cè)；最后，復(fù)雜基質(zhì)對(duì)微量雜質(zhì)的干擾較大，影響檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。因此，開發(fā)高靈敏度、高特異性的檢測(cè)方法對(duì)于保障藥品安全至關(guān)重要。

高靈敏度檢測(cè)方法的開發(fā)

樣品前處理技術(shù)

針對(duì)不同基質(zhì)的特點(diǎn)，本研究開發(fā)了多種樣品前處理技術(shù)：

· 固相萃取(SPE)：利用不同極性吸附劑對(duì)亞硝胺進(jìn)行選擇性吸附與洗脫

· 液液萃取(LLE)：基于亞硝胺在不同溶劑中分配系數(shù)的差異進(jìn)行分離

· 超聲輔助萃取(UAE)：提高萃取效率，縮短前處理時(shí)間

· 分子印跡聚合物(MIP)技術(shù)：提高選擇性，降低基質(zhì)干擾

儀器分析方法

本研究采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)作為亞硝胺類化合物的主要檢測(cè)技術(shù)，并進(jìn)行了以下優(yōu)化：

1. 色譜條件優(yōu)化：評(píng)估多種色譜柱和流動(dòng)相組合，選擇HILIC柱對(duì)極性亞硝胺和C18柱對(duì)中低極性亞硝胺進(jìn)行分離

2. 質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化：建立多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式，選擇高特異性的母離子-子離子對(duì)，提高檢測(cè)靈敏度

3. 離子源優(yōu)化：比較ESI、APCI等不同離子化技術(shù)，確定最佳離子化條件

方法驗(yàn)證

開發(fā)的檢測(cè)方法按照ICH Q2(R1)指南進(jìn)行全面驗(yàn)證，驗(yàn)證項(xiàng)目包括：

1. 特異性

通過空白、標(biāo)準(zhǔn)品、加標(biāo)樣品和實(shí)際樣品的比較，確認(rèn)方法對(duì)7種常見亞硝胺(NDMA、NDEA、NMBA、NIPEA、NDIPA、NEIPA和NDBA)具有良好的特異性，無明顯干擾峰。

2. 線性和范圍

所有目標(biāo)亞硝胺的線性相關(guān)系數(shù)R2>0.998，線性范圍覆蓋0.01-10.0 ng/mL，滿足痕量檢測(cè)需求。

3. 準(zhǔn)確度和精密度

在低、中、高三個(gè)濃度水平(LOQ、5×LOQ和10×LOQ)的回收率為85.3%-108.6%，RSD<10%，符合方法驗(yàn)證要求。

4. 檢測(cè)限和定量限

方法檢測(cè)限(LOD)達(dá)到0.003-0.01 ng/mL，定量限(LOQ)為0.01-0.03 ng/mL，滿足各國法規(guī)對(duì)亞硝胺類雜質(zhì)的控制要求。

5. 穩(wěn)定性

樣品和標(biāo)準(zhǔn)品在室溫、冷藏和冷凍條件下均具有良好的穩(wěn)定性，72小時(shí)內(nèi)濃度變化<5%。

方法應(yīng)用

該方法已成功應(yīng)用于多種藥物制劑和原料藥中亞硝胺類雜質(zhì)的檢測(cè)，包括沙坦類、甲硝唑、雷尼替丁等高風(fēng)險(xiǎn)藥品。通過系統(tǒng)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和檢測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)了部分批次產(chǎn)品中亞硝胺含量超標(biāo)的情況，為藥品質(zhì)量控制提供了可靠的技術(shù)支持。

結(jié)論與展望

本研究開發(fā)的痕量亞硝胺類雜質(zhì)高靈敏度檢測(cè)方法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，能夠滿足藥品質(zhì)量控制的嚴(yán)格要求。未來研究將進(jìn)一步擴(kuò)展亞硝胺類化合物的檢測(cè)范圍，結(jié)合先進(jìn)儀器技術(shù)如高分辨質(zhì)譜(HRMS)提高檢測(cè)能力，并探索更高效的樣品前處理技術(shù)，為藥品安全提供更全面的技術(shù)保障。